一、細胞基本屬性
細胞名稱 ：CALU-3（人肺腺癌（胸水）細胞）
細胞別稱 ：CaLu-3; CALU-3; Calu 3; Calu3; CALU3
細胞貨號 ：SNL-214
細胞種屬 ：人
生長情況 ：貼壁
培養(yǎng)條件 ：H-DMEM+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境 ：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二、細胞培養(yǎng)操作
換液周期 ：2-3天
培養(yǎng)基體積 ：T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
傳代比例 ：1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定）
傳代方法 ：
1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s，吸走潤洗的PBS；
3.T25瓶加1ml左右胰m，輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰m鋪勻瓶底細胞層；
4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化；
5.消化到細胞間隙變大，但未*脫落時加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰m消化；
6.混勻細胞，900rpm離心3-5min，棄上清；
7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；
8.補足*培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；
注意事項 ：不同品牌胰m消化時間差別較大，注意嚴格控制消化時間
消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。
三、細胞凍存操作
凍存液配方 ：92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規(guī)格 ：200-300萬/ml，1ml每管
凍存方法 ：
1.消化并離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；
2.將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管；
3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
注意事項 ：凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案
Tips：
1.細胞貼壁較緊，消化時間偏長。消化時邊緣細胞先脫落，可以吸取正在消化的胰m吹下細胞收集起來，再加新的胰m繼續(xù)消化剩下的細胞；
2.細胞生長十分緩慢，傳代建議按1:2，傳代前密度不要過低。

我們推薦使用尚恩生物CALU-3（人肺腺癌（胸水）細胞）*培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號：SNLM-214）作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。