小鼠原代細(xì)胞培養(yǎng)是指直接從動(dòng)物體內(nèi)獲取的細(xì)胞、組織和器官，經(jīng)體外培養(yǎng)后，直到傳代為止。這種培養(yǎng)，首先用無(wú)菌操作的方法，從動(dòng)物體內(nèi)取出所需的組織（或器官），經(jīng)消化，分解成單個(gè)游離細(xì)胞，在人工培養(yǎng)下，使其不斷的生長(zhǎng)及繁殖。

 

　　細(xì)胞培養(yǎng)是一種操作繁瑣而又要求十分嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)技術(shù)。是用無(wú)菌的方法將動(dòng)物體內(nèi)的組織（或器官）取出，模擬動(dòng)物體內(nèi)的生理?xiàng)l件，在體內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，使其不斷生長(zhǎng)、繁殖，人們借以觀察細(xì)胞生長(zhǎng)、繁殖、細(xì)胞分化以及細(xì)胞衰老等過(guò)程的生命現(xiàn)象。要使細(xì)胞能在體外長(zhǎng)期生長(zhǎng)，必須滿足兩個(gè)基本要求：一是供給細(xì)胞存活所必須的條件，如適量的水、無(wú)機(jī)鹽、氨基酸、維生素、葡萄糖及其有關(guān)的生長(zhǎng)因子、氧氣、適宜的溫度，注意外環(huán)境酸堿度與滲透壓的調(diào)節(jié)。二是嚴(yán)格控制無(wú)菌條件。

 

　　細(xì)胞培養(yǎng)的意義：具有其他生物技術(shù)不可對(duì)比的優(yōu)點(diǎn)培養(yǎng)條件易改變和控制便于單因子分析便于人們直接對(duì)細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)、細(xì)胞生長(zhǎng)及發(fā)育等過(guò)程的觀察在生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域如分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)及病毒學(xué)等已被廣泛應(yīng)用。細(xì)胞培養(yǎng)的局限性在脫離機(jī)體復(fù)雜環(huán)境下細(xì)胞培養(yǎng)條件與軀體環(huán)境有一定距離觀察到的結(jié)果有時(shí)難以正確反映機(jī)體內(nèi)的狀況細(xì)胞培養(yǎng)得到的產(chǎn)物少。

 

　　小鼠原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟:

　　1、小鼠麻醉

　　根據(jù)體重計(jì)算相應(yīng)的麻醉劑量并腹腔注射（也可以用異氟烷進(jìn)行空氣麻醉）

　　2、對(duì)*麻醉后的小鼠進(jìn)行解剖，打開(kāi)腹腔，找到小鼠下腔靜脈及門靜脈，使用滯留針插入下腔靜脈，將50-60ml的緩沖溶液一在10-20min內(nèi)緩慢注射進(jìn)入小鼠血液循環(huán)內(nèi)，看到小鼠肝臟有明顯腫脹時(shí)剪開(kāi)門靜脈，完成后改用緩沖溶液二進(jìn)行沖洗。

　　3、沖洗完成后，將小鼠肝臟剪下，轉(zhuǎn)移至DMEM高糖培養(yǎng)基，用DMEM培養(yǎng)基清洗2-3次后，使用滅菌鑷子將肝臟在培養(yǎng)基內(nèi)撕開(kāi)，使原代肝細(xì)胞從肝臟內(nèi)流出。

　　4、將分離得到的肝臟細(xì)胞過(guò)篩網(wǎng)篩選，過(guò)濾組織碎塊及其他雜質(zhì)，并對(duì)細(xì)胞混懸液離心，按照一定的離心力得到初步的肝細(xì)胞沉淀，此時(shí)的肝細(xì)胞中混雜著肝臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞和非實(shí)質(zhì)細(xì)胞，需要使用percoll離心液進(jìn)行梯度離心。

　　5、梯度離心后的細(xì)胞即為原代肝臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞，重懸后計(jì)數(shù)即可用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)，若對(duì)細(xì)胞純度存疑，也可以進(jìn)行流式測(cè)定。