--細(xì) 胞 基 本 信 息---

細(xì)胞名稱： OCI-LY3(人彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞)

細(xì)胞別稱： OCI-LY3; OCI-ly3; OCI-LY-3; Oci-Ly-3; OCI-Ly 3; OCILY-3; OCI-Ly03; OCI Ly3; OCILY3; Ly3; LY3

細(xì)胞貨號(hào)： SNL-226

生長(zhǎng)特性： 懸浮

培養(yǎng)條件： 1640+20% FBS+1% P/S

培養(yǎng)環(huán)境： 空氣，95%； 二氧化碳 (CO2)，5%；37℃

細(xì)胞簡(jiǎn)介： OCI-LY3細(xì)胞于1983年從一名復(fù)發(fā)時(shí)患有B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL，彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤，DLBCL，4B期）的52歲男性骨髓樣本中建立，是一種激活型的B淋巴細(xì)胞。OCI-LY3細(xì)胞在文獻(xiàn)中描述為EBV陰性，缺乏典型的t（8；14）易位。OCI-LY3細(xì)胞HBV、HCV、HIV-1、HIV-2、MLV均呈陰性。

細(xì)胞正常生長(zhǎng)形態(tài)照片

OCI-LY3細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

l OCI-LY3細(xì)胞大部分聚集成葡萄串狀懸浮生長(zhǎng)，細(xì)胞團(tuán)較大時(shí)需要吹打成小團(tuán)，防止團(tuán)塊中間的細(xì)胞因營(yíng)養(yǎng)不足而死亡，小團(tuán)塊無(wú)需處理。除非實(shí)驗(yàn)需要，不建議將細(xì)胞吹散成單個(gè)細(xì)胞。

l OCI-LY3細(xì)胞對(duì)血清要求高，應(yīng)該使用優(yōu)質(zhì)血清進(jìn)行培養(yǎng)，血清比例為20%；

l 隨著培養(yǎng)時(shí)間增加，會(huì)有部分細(xì)胞貼壁伸展的情況，傳代時(shí)可以輕輕吹打細(xì)胞貼壁面，吹下的細(xì)胞可以正常傳代，未吹下的細(xì)胞無(wú)需收集。

l 該細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程存在密度依賴的情況，細(xì)胞密度建議維持在1E5-5E5/ml之間，密度過(guò)低或者過(guò)高可能會(huì)影響細(xì)胞狀態(tài)；

OCI-LY3細(xì)胞換液方法

l 半換液法：

1. 準(zhǔn)備所需的培養(yǎng)基、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（培養(yǎng)基提前預(yù)熱）

2. 將培養(yǎng)瓶靜置5-10min，待細(xì)胞沉底；（肉眼觀察細(xì)胞沉底情況）

3. 吸頭緊貼液體表面，小心吸出一半的培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)移到離心管；

4. 900-1000rpm 3min離心，離心管里若有細(xì)胞，則用新鮮培養(yǎng)基重懸后放回原瓶；

5. 原瓶補(bǔ)充一半的新鮮培養(yǎng)基。

l 離心換液法：

1. 準(zhǔn)備所需的培養(yǎng)基、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（培養(yǎng)基提前預(yù)熱）

2. 將所有細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中；

3. 900-1000rpm，3min離心；

4. 培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；

5. 離心完成后棄上清，加適量新鮮培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞沉淀，將細(xì)胞懸液接種回培養(yǎng)瓶中，混勻細(xì)胞，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

OCI-LY3細(xì)胞傳代方法

l 離心法：

1. 準(zhǔn)備所需的培養(yǎng)基、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（培養(yǎng)基提前預(yù)熱）

2. 用移液器吸取培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中；

3. 900-1000rpm，3min離心收集細(xì)胞；

4. 在培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；（T25推薦10mL，T75推薦20mL）

5. 離心完成后，棄離心管內(nèi)上清，然后加入適量新鮮培養(yǎng)基，輕輕重懸吹散細(xì)胞，將細(xì)胞懸液均勻接種至若干個(gè)新的培養(yǎng)瓶中，輕輕混勻后將細(xì)胞放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

l 直接分瓶法：

1. 輕輕將細(xì)胞吹散成小團(tuán)并混勻。

2. 用移液器吸取培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)細(xì)胞懸液，均分到若干個(gè)新培養(yǎng)瓶中，每瓶再補(bǔ)充適量的新鮮培養(yǎng)基，輕輕混勻后將細(xì)胞放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

Tips：

l 注意控制吹打力度盡可能輕柔，吹打次數(shù)不要過(guò)多，避免細(xì)胞受機(jī)械損傷。

l 傳代比例推薦1：2

OCI-LY3細(xì)胞凍存方法

1. 準(zhǔn)備所需的培養(yǎng)基、PBS、血清、DMSO、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（試劑需提前預(yù)熱）

Tips：若凍存前培養(yǎng)基已經(jīng)變黃，先換液靜置培養(yǎng)4h左右，待細(xì)胞活力穩(wěn)定后再進(jìn)行凍存。

2. 根據(jù)收集到細(xì)胞量，配制相應(yīng)量的凍存液，并準(zhǔn)備相應(yīng)數(shù)量的凍存管，在凍存管上標(biāo)志細(xì)胞名稱，代次，凍存時(shí)間等信息。推薦凍存液配方：92%FBS+8%DMSO或92%完*培養(yǎng)基+8%DMSO；凍存密度300萬(wàn)細(xì)胞/mL/管。

Tips：凍存密度過(guò)低將導(dǎo)致復(fù)蘇后狀態(tài)不佳。

3. 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中1000rpm，3min離心收集細(xì)胞；

4. 離心完成后棄上清，加入相應(yīng)量的配置好的凍存液輕輕重懸混勻細(xì)胞，將細(xì)胞懸液分裝至凍存管中。注意吹打力度，不要產(chǎn)生過(guò)多氣泡；

Tips：加入凍存液混勻細(xì)胞后及時(shí)分裝并將細(xì)胞降溫凍存，以減少DMSO對(duì)細(xì)胞的毒性。

5. 將細(xì)胞放置程序降溫凍存盒中，再將凍存盒轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱進(jìn)行降溫凍存。

6. 次日（16h-24h后）復(fù)蘇一管檢查凍存效果，確認(rèn)沒(méi)問(wèn)題后及時(shí)將凍存細(xì)胞放置液氮中保存，細(xì)胞在-80℃冰箱放置時(shí)間不要超過(guò)3天。

OCI-LY3細(xì)胞復(fù)蘇方法

1. 提前將水浴鍋預(yù)熱至37℃，培養(yǎng)基復(fù)溫至室溫或37℃，離心機(jī)設(shè)置好轉(zhuǎn)速；

2. 將凍存細(xì)胞從液氮或-80℃冰箱中取出，迅速置于37℃水浴，快速搖晃至完*融化，融化時(shí)間不超過(guò)2min；

Tips：

l 若液氮或冰箱距離細(xì)胞房較遠(yuǎn)，細(xì)胞需要放在干冰或冰盒上運(yùn)送至細(xì)胞房。

l 水浴時(shí)使用一次性PE手套包住凍存管避免直接接觸水源，避免污染。

3. 直接將凍存管900-1000rpm 2min離心，同時(shí)在培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；

4. 離心完成后棄上清，吸取1mL新鮮培養(yǎng)基（建議血清濃度提高至20%）輕輕重懸細(xì)胞，吹散細(xì)胞后接種到培養(yǎng)瓶中；

5. 使用十字法或8字法將細(xì)胞混勻后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

Tips：整個(gè)細(xì)胞復(fù)蘇過(guò)程在盡可能5-10min內(nèi)完成。

OCI-LY3細(xì)胞收貨攻略

1. 拆封包裝盒，確認(rèn)細(xì)胞，說(shuō)明書(shū)等是否齊全，收貨細(xì)胞名與所購(gòu)買細(xì)胞是否符合；

2. 觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，有無(wú)漏液，培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基是否有肉眼可見(jiàn)的絮狀物或者渾濁等，發(fā)現(xiàn)異常及時(shí)拍照聯(lián)系銷售人員；

3. 確認(rèn)無(wú)異常后，將培養(yǎng)瓶表面消毒，然后撕掉封口膜豎立放入培養(yǎng)箱平衡4h左右，讓?xiě)腋〖?xì)胞沉下培養(yǎng)瓶底部；

4. 平衡過(guò)程中可以仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，知悉細(xì)胞所需培養(yǎng)體系，培養(yǎng)環(huán)境以及培養(yǎng)注意事項(xiàng)等；

5. 平衡完成后豎立取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，此時(shí)大部分細(xì)胞沉在培養(yǎng)瓶底部，小心吸取上清至離心管中，保留10mL左右培養(yǎng)基在培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，小心操作，盡量不要吸到沉在底部的細(xì)胞；

6. 將離心管1200rpm，5min離心收集未沉下培養(yǎng)瓶底部的細(xì)胞，上清可以4℃保存，后續(xù)用于培養(yǎng)細(xì)胞，以平穩(wěn)過(guò)度到自己的培養(yǎng)基。將收集到的細(xì)胞接種至原培養(yǎng)瓶；

7. 觀察細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)，以及團(tuán)塊數(shù)量、大小決定傳代或繼續(xù)培養(yǎng)。

常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞碎片較多怎么處理？

1. 細(xì)胞內(nèi)的黑色顆粒是細(xì)胞外分泌泡及細(xì)胞器折光，這個(gè)屬于細(xì)胞自身特性，無(wú)法清除也無(wú)法改變，大部分細(xì)胞都會(huì)有這種現(xiàn)象，只是不同細(xì)胞顆粒多少有區(qū)別，細(xì)胞培養(yǎng)體系不適應(yīng)、營(yíng)養(yǎng)缺乏、滲透壓異常等均可能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)顆粒增加，建議使用合適的培養(yǎng)條件。

2. 細(xì)胞外的黑色顆粒大部分是細(xì)胞碎片和細(xì)胞代謝產(chǎn)物，可通過(guò)800rpm，3min低速離心以去除部分碎片。少量碎片不影響細(xì)胞生長(zhǎng)，不建議頻繁離心。

產(chǎn)品推薦：

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