我們現(xiàn)在所知道的地球上的生命，人類、動物、植物，還有肉眼看不見的微觀世界，這些林林總總的生命體都是由細(xì)胞所組成的。所以，生命體如何繁衍、變化、進(jìn)化，組成紛繁復(fù)雜的大千世界，全都是依靠這些細(xì)胞在工作。細(xì)胞也有各式各樣不同的分類，其中有一類細(xì)胞它很特殊，而且擁有其他細(xì)胞不具有的一項重要功能——不斷繁衍、自我復(fù)制、自我更新。這類細(xì)胞就是干細(xì)胞。

　　人正常肝細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

　　1）培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

　　1.準(zhǔn)備培養(yǎng)基；

　　2.培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%；

　　3.凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

　　2）細(xì)胞處理：

　　復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入lOcm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

　　對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2ml消化液于培養(yǎng)瓶中，置于37°C培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。